2021年中考生物知識點之：分離土壤中分解尿素的微生物

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　　分離土壤中分解尿素的微生物

　　1．篩選菌株

　　原則：

　　人為提供有利于目的菌生長的條件，同時抑制或阻止其他微生物的生長。

　　培養基的成分：

　　尿素作為惟一的氮源（選擇培養基、固體培養基）。

　　2.菌落培養和計數

　　對照：

　　將不接種的培養基置于相同溫度恒溫箱培養，目的是證實培養基是否被雜菌污染（或滅菌是否徹底）。

　　統計菌落數目的方法：

　　（1）顯微鏡直接計數法

　　利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積樣品中微生物數量。缺點是不能區分死菌與活菌。

　　（2）間接計數法(活菌計數法)

　　①原理：

　　當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。

　　②計算公式：

　　每克樣品中的菌株數＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數。

　　③操作：

　　設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。同時為了保證結果準確，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數（個人認為，浙科版認為每個培養皿中有20個以內菌落，目的是分離，然后培養得到較大的菌落）。

　　3.菌種的鑒定

　　方法：

　　檢測培養基pH的變化判斷，用酚紅指示試劑來鑒別，菌落周圍有紅色環帶。

　　原理：

　　在細菌分解尿素時，分泌的脲酶將尿素分解為氨，氨使培養基堿性增高，pH升高，使酚紅呈紅色（紅色環帶）。

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